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基 因 型MATahis3200trp1-901leu2-3,112ade2LYS2::(lexAop)4-HIS3ura3::(lexAop)8-lacZade2::(lexAop) 8-ADE2 GAL4简 要 说 明DUALmembrane机软件的性是DUALsystems BioTech装修公司开发管理的好一点建立跨膜淀粉酶质间做好帮助的测量技术应用，它再生利用转移的泛素机软件的性（split-ubiquitin）直观测量天然水方式下膜淀粉酶质间的做好帮助，是到目前为止目前上独一无二测量膜淀粉酶质间做好帮助的鲜酒曲双杂机软件的性。此机软件的性利用NMY51鲜酒曲菌株，可直观流量流量转换质粒实施淀粉酶质互作效验或筛库经过多次实验发现；此菌株Transformation  marker为:  trp1, leu2-3，查测结果书遗传表观遗传为：HIS3, ADE2 和lacZ，一是步在营养价值丰富不足型查测结果书遗传表观遗传（HIS3, ADE2）实施的抑制性发育建立，进一歩在 LacZ 查测结果书遗传表观遗传实施β-半乳含糖析显色的按量或半按量建立，二个独有的查测结果书遗传表观遗传，受不同于启用子的政策调控，降底假呈阳性率有。的工作原理：泛素（ubiquitin）团伙量小，由 76aa 残基构造；泛素是 吸附数据信号团伙，都就能够连接方式一并一些淀粉酶质质的 N 端，2被泛素专心性淀粉酶质酶（UBPs）认别，所以影响与泛素联接的淀粉酶质被酶解。泛素都就能够其他划分成俩个分：N 端（Nub），C 端（Cub）。最先，其他地将泛素 Nub 的 3 位异亮氨酸变动为甘氨酸（NubI 变动为NubG）。其实与 Cub 的亲密切协作尽也许降底，禁止了 Cub 和 Nub 个人相构建或非常达到的也许性。2，将Cub 一部分与人工工资人工图片的 LexA-VP16 转录缴活指数公式就构建成图片一个就构建淀粉酶质Cub-LexA-VP16。顺利状况下 NubG不与Cub 相构建，UBPs 又不能认别转移的泛素，转录缴活指数公式又不会被切下来来。之后，就要测量的淀粉酶质质依次与NubG和Cub就构建，变成 bait 就构建蛋（bait-cub-LexA -VP16）和 prey 就构建淀粉酶质（prey-NubG）。只要 bait 和 prey产生做好帮助，就可能驱使 NubG 和 Cub 的做好非常达到，被 UBPs 认别，影响 LexA-VP16 的解离，打开核内，所以缴活查测结果书遗传表观遗传的转录。 此机软件的性导致用四大Bait质粒：pBT3-N，pBT3-SUC，pBT3-STE，pBT3-C，建立标签均为LEU；三种类型Prey质粒：pPR3-C ，pPR3-SUC，pPR3-STE，建立标签均为TRP。High5TM一系列NMY51感想态组织受损癌组织经特种加工过程设计制作，-80℃可同步保存二十一个月，经PGADT7质粒测量流量流量转换高效果>104cfu/μg DNA 。操 作 说 明1.取1管感想态组织受损癌组织置冰里运动化掉，6 000 rpm离心分离力力1min，去除上清。2.添加320 μl LiTE/PEG液体，重悬组织受损癌组织，2添加10μl Carrier DNA(95-100 度5min 最快冰浴，抄袭一天)，预冷必要性质粒2-5ug,质量不可多于20ul。3.做好混匀，于30度250 rpm转数下养育30 min。4.42度热激2.5min。5.6000 rpm离心分离力力1min，去除上清。6.添加1 ml TE液体，温和性重悬组织受损癌组织。7.6000 rpm离心分离力力1min，去除上清。8.添加100 μl TE液体，重悬组织受损癌组织，将组织受损癌组织施胶于相同的营养价值丰富不足型胶体人工图片养育基。9.30度上下颠倒养育48-96h，终会变成尺寸大小为宜的鲜酒曲菌落。 Preparation of Media：YPDA （1L）:Tryptone               20gyeast extract             10g 0.2% adenine            15ml保湿保湿到 950ml，  用硝酸调PH到 6.5Agar                 20g (for plates only)121度，1五一分钟高电压高压低压蒸汽无菌，待养育基气温降回55度时，添加已滤出的40% 常见葡萄品种糖 50 ml 0.2% adenine(1L)Adenine    2g保湿保湿到1L，溶水后高电压高压低压蒸汽无菌或0.22um滤膜滤出除菌注 意 事 项1.感想态组织受损癌组织最佳在冰里运动化掉。2.流量流量转换减阻剂值的质粒可相同减掉然后用在涂板的菌量。3.一并流量流量转换2-3种质粒时可上升质粒的消耗量。4.NMY51鲜酒曲菌株对常温敏感脆弱，最适发育气温为27-30℃；超出31℃，发育高的速度和流量流量转换高效果呈指数公式骤降。5.鲜酒曲在不足养育基中发育高的速度比YPDA养育基慢，养育基中不足有效成分越高，发育越卡，以流量流量转换涂板概述：涂YPDA手机pad29℃，48h养育可以看出内径为1mm克隆；涂SD单缺手机pad29℃，48-60h养育可以看出内径为1mm克隆，涂SD双缺手机pad29℃，60-80h养育可以看出内径为1mm克隆，涂SD三缺或四缺手机pad手机pad29℃，80-90h养育可以看出内径为1mm克隆。  

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