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基 因 型MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2简 要 说 明EGY48菌株是Clontech装修公司搭建的LexA 程序鲜发酵粉双杂实验所用菌株，MATa型，可直接性转成质粒来淀粉酶互作证实或筛库实验室验测；Transformation  marker为: his3, trp1, ura3，行业意见书模板dna为：LEU2；行业意见书模板dnaUAS（上下游提高队列）是来于于LexA op(x6)，只剩下当Bait和Prey互作时就可以无法LEU2传达。EGY48-LexA鲜发酵粉双杂程序程序是需要三大质粒配置选用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒pLexA的挑选标记为HIS3，在传达DNA-BD(是来于原核的206个碳水化合物残基构造的LexA淀粉酶)与的淀粉酶(Bait)的溶合淀粉酶；质粒pB42AD的挑选标记为TRP1，在传达AD(是来于类病毒性疱疹类病毒的815个碳水化合物残基构造的B42AD淀粉酶)与的淀粉酶（Prey）的溶合淀粉酶；行业意见书模板质粒p8op-LacZ的挑选标记为URA3，行业意见书模板dna为LacZ，行业意见书模板dnaUAS是来于于LexA op(x8) ，只剩下当Bait和Prey互作时就可以无法LacZ传达。High5TM系Y2HGold心得态受损細胞经特异加工工艺制造，-80℃可留存两月，经PGBKT7质粒验测转成速率>104cfu/μg DNA 。操 作 说 明1.取1管心得态受损細胞置冰上运动运动化掉，6 000 rpm抽滤1min，清掉上清。2.加进320 μl LiTE/PEG稀硫酸，重悬受损細胞，其次加进10μl Carrier DNA(95-100 度5min 更快冰浴，连续一些)，预冷的质粒2-5ug,表面积不太多于20ul。3.有效混匀，于30度250 rpm速比下培養计划计划30 min。4.42度热激2.5min。5.6000 rpm抽滤1min，清掉上清。6.加进1 ml TE稀硫酸，轻柔重悬受损細胞。7.6000 rpm抽滤1min，清掉上清。8.加进100 μl TE稀硫酸，重悬受损細胞，将受损細胞施胶于响应的美味异常现象型固态自动合成培養计划计划基。9.30度反过来培養计划计划48-96h，一直到转变成多少适于的鲜发酵粉菌落。Preparation of Media：YPDA （1L）:Tryptone                20gyeast extract             10g 0.2% adenine            15ml皮肤保湿到 950ml，  用硝酸调PH到 6.5Agar                 20g (for plates only)121度，1五半小时进行各类高压过虑除菌方法，待培養计划计划基温湿度降成55度时，加进已过虑水的40% 冬枣糖 50 ml0.2% adenine(1L)Adenine    2g皮肤保湿 到1L，融掉后进行各类高压过虑除菌方法或0.22um滤膜过虑水除菌注 意 事 项1.心得态受损細胞做好在冰上运动运动化掉。2.转成母液值的质粒可响应避免决定在涂板的菌量。3.此外转成2-3种质粒时可加强质粒的运用量。4.EGY48鲜发酵粉菌株对耐高温灵敏，最适产生温湿度为27-30℃；如果超过31℃，产生网络线速度和转成速率呈指数值的降低。5.鲜发酵粉在异常现象培養计划计划基中产生网络线速度比YPDA培養计划计划基慢，培養计划计划基中异常现象基本成分越低，产生越重，以转成涂板举例：涂YPDA板式29℃，48h培養计划计划隐约隐约看得出半径1mm克隆；涂SD单缺板式29℃，48-60h培養计划计划隐约隐约看得出半径1mm克隆，涂SD双缺板式29℃，60-80h培養计划计划隐约隐约看得出半径1mm克隆，涂SD三缺或四缺板式板式29℃，80-90h培養计划计划隐约隐约看得出半径1mm克隆。

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