产品介绍

基 因 型MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101,  trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met–, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ, MEL1简 要 说 明Y187菌株是Clontech工厂制做的GAL4机平台酒曲单杂，双杂实验室用菌株，MATα型，可之间被被就来为质粒或与MATa型酒曲菌株（Y2HGold，AH109等）实现mating实际操作实现筛库经过多次实验发现。Transformation  marker为: trp1, leu2，查重结果人类表观遗传为：lacZ, MEL1。Y187 -GAL4酒曲双杂机平台都要区别质粒之间配套动用：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的筛分标签为TRP1，应用在表述方法DNA-BD(基酒曲转录组成成分GAL4N端1~ 174位胺基酸)与阶段方向蛋清质(Bait)的容合蛋清质；质粒PGADT7的筛分标签为LEU，应用在表述方法AD(GAL4 东东助手768 ~881 位胺基酸)与阶段方向蛋清质（Prey）的容合蛋清质。GAL4机平台机制：是一些详尽的酒曲转录组成成分GAL4可划分功能性上之间独立自主的两人结构类型域：应使用于N端1 ~ 174位胺基酸路段的DNA结合域（DNA-BD）和应使用于东东助手768 ~881 位胺基酸路段的转录刺激域(AD)。DNA-BD也能判断GAL4-responsive gene的品牌进入校园市场刺激回文序列UAS，并与之结合。而AD可能再进行UAS河流河流下游的人类表观遗传实现转录。BD和AD简单都存在没办法刺激转录，但当后者亲近时，则出现详尽的GAL4特异性，使富含UAS的再进行子河流河流下游人类表观遗传转录表述方法。很普通 标准下，BD不与AD结合，就要查重的蛋清质质都与BD和AD容合，出现bait 容合蛋清质（bait -BD）和 prey 容合蛋清质（prey-AD），倘若 bait 和 prey有之间做用，都会有助于 BD 和 AD 的之间亲近，出现详尽的GAL4，可以刺激查重结果人类表观遗传的转录。Y187有两人查重结果人类表观遗传：lacZ, MEL1，都由区别区别的再进行子（G1，M1）再进行，这区别再进行子只剩下GAL4判断的17bp中心区相当，任意局部均区别，尽可能缩减了酒曲双杂假抗体阳性有的机率。High5TM编Y187感觉到态神经元系经特殊化加工制做，-80℃可保存图片这三月，经PGADT7质粒查重被被就来为有效应>104cfu/μg DNA 。 操 作 说 明1.取1管感觉到态神经元系置冰里运动冰化，6 000 rpm离心法法法1min，盖住上清。2.倒入320 μl LiTE/PEG溶剂，重悬神经元系，最后倒入10μl Carrier DNA(95-100 度5min 短时间冰浴，去重复1次)，预冷原因质粒2-5ug,体型不太多于20ul。3.足够混匀，于30度250 rpm发动机转速下培植30 min。4.42度热激2.5min。5.6000 rpm离心法法法1min，盖住上清。6.倒入1 ml TE溶剂，性情温和重悬神经元系。7.6000 rpm离心法法法1min，盖住上清。8.倒入100 μl TE溶剂，重悬神经元系，将神经元系涂装于响应的养分一些通病型固状获得视频培植基。9.30度上下颠倒培植48-96h，直接左右出现深浅适当的酒曲菌落。Preparation of Media：YPDA （1L）:Tryptone                20gyeast extract            10g 0.2% adenine           15ml保湿补水保湿到 950ml，  用硫酸调PH到6.5Agar              20g (for plates only)121度，1五分钟的英文高压电低压无菌，待培植基平均溫度降为55度时，倒入已活性炭过滤装置的40% 红提糖 50 ml0.2% adenine(1L)Adenine    2g保湿补水保湿到1L，水解后高压电低压无菌 或0.22um 滤膜活性炭过滤装置除菌 注 意 事 项1.感觉到态神经元系建议在冰里运动冰化。2.被被就来为高盐浓度的质粒可响应可以减少之后应用在涂板的菌量。3.互相被被就来为2-3种质粒时可加剧质粒的储电量。4.Y2HGold酒曲菌株对溫度高的敏感，最适植物的发展的平均溫度为27-30℃；超出31℃，植物的发展的时间慢和被被就来为有效应呈指數的降低。5.菌落变粉都是环境污染，是酒曲神经元系植物的发展的中是一些多见问题。当神经元系在pad培植几十四天，pad上的Adenine被酒曲需要量立即，酒曲命令实现自基础代谢方式获得视频Adenine以供使用，然后，很菌株的ADE2人类表观遗传被危害，Adenine获得视频方式困难重重；又基于其ADE4,5,6,7,8人类表观遗传均很普通 ，所以咧会导致两边副产物P-ribosylamino imidazole（AIR）在神经元系中累积而使菌落就来为粉颜色。6.酒曲在一些通病培植基中植物的发展的时间慢比YPDA培植基慢，培植基中一些通病组成成分太多，植物的发展的会慢，以被被就来为涂板来说：涂YPDApad29℃，48h培植由此看不见长度约1mm克隆；涂SD单缺pad29℃，48-60h培植由此看不见长度约1mm克隆，涂SD双缺pad29℃，60-80h培植由此看不见长度约1mm克隆，涂SD三缺或四缺padpad29℃，80-90h培植由此看不见长度约1mm克隆。  

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