产品介绍

基 因 型MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ,LYS2 : : GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3, MEL1 GAL2UAS-GAL2TATA-ADE2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ简 要 说 明AH109菌株来原于PJ69-2A 发酵粉菌株，将lacZ该判断结果dna运用PJ69-2A起源了AH109，此菌株是Clontech集团公司建设的GAL4控制装置发酵粉双杂实验性用菌株，MATa型，可就直接转换质粒或与MATα型发酵粉菌株Y187借助mating作业操作蛋清互作校验或筛库耐压试验。Transformation  marker为: trp1, leu2，该判断结果dna为：lacZ, HIS3, ADE2, MEL1。AH109 -GAL4发酵粉双杂控制装置需求四种质粒智能化操作：PGBKT7和PGADT7。质粒PGBKT7的挑选标志的意思logo为TRP1，使适用表示DNA-BD(出自发酵粉转录要素GAL4N端1~ 174位球核淀粉酶质酶质)与对方蛋清(Bait)的相融蛋清；质粒PGADT7的挑选标志的意思logo为LEU，使适用表示AD(GAL4 电脑端768 ~881 位球核淀粉酶质酶质)与对方蛋清（Prey）的相融蛋清。GAL4控制装置机制：一位完正的发酵粉转录要素GAL4可可分成功能性上相护独立空间的多个结构的域：处于N端1 ~ 174位球核淀粉酶质酶质路段的DNA联系域（DNA-BD）和处于电脑端768 ~881 位球核淀粉酶质酶质路段的转录成功刺激域(AD)。DNA-BD也能辨识GAL4-responsive gene的中中下面成功刺激回文序列UAS，并与之联系。而AD也可以打火UAS中下面的dna操作转录。BD和AD单个有着不可能成功刺激转录，但当矛盾律亲近时，则显现出完正的GAL4特异性，使具有刺激性UAS的打火子中下面dna转录表示。普通情况环境下，BD不与AD联系，想要判断的蛋清质区分与BD和AD相融，型成 bait 相融蛋清（bait -BD）和 prey 相融蛋清（prey-AD），若是  bait 和 prey进行了相护做用，也会促进 BD 和 AD 的相护亲近，型成完正的GAL4，因为成功刺激该判断结果dna的转录。AH109有二个该判断结果dna：lacZ, HIS3, ADE2, MEL1，区分由五种类型不一样的打火子（GAL1，GAL2，MEL1）打火，这五种类型打火子只要 GAL4辨识的17bp重点区相似，其他的书部位均不一样，能大大减小了发酵粉双杂假弱阳进行了的概率计算公式。High5TM一系列AH109感慨态受损肿瘤上皮癌内部经特出生产工艺设计制作，-80℃可同步保存六个月时间，经PGADT7质粒判断转换工作效应>104cfu/μg DNA 。操 作 说 明1.取1管感慨态受损肿瘤上皮癌内部置冰面溶化，6 000 rpm抽滤式1min，弄掉上清。2.引入320 μl LiTE/PEG硫酸铜氢氧化钠硫酸铜溶液，重悬受损肿瘤上皮癌内部，以后引入10μl Carrier DNA(95-100 度5min 短时间冰浴，重叠一次性)，预冷的质粒2-5ug,密度不于20ul。3.有效混匀，于30度250 rpm带速下培養计划30 min。4.42度热激2.5min。5.6000 rpm抽滤式1min，弄掉上清。6.引入1 ml TE硫酸铜氢氧化钠硫酸铜溶液，湿润重悬受损肿瘤上皮癌内部。7.6000 rpm抽滤式1min，弄掉上清。8.引入100 μl TE硫酸铜氢氧化钠硫酸铜溶液，重悬受损肿瘤上皮癌内部，将受损肿瘤上皮癌内部涂抹于特定的健康多见问题型胶体制成培養计划基。9.30度倒放培養计划48-96h，终会型成大大小小该用的发酵粉菌落。Preparation of Media：YPDA （1L）:Tryptone                20gyeast extract             10g 0.2% adenine            15ml补充水分到 950ml，  用酸洗调PH到6.5Agar                20g (for plates only)121度，14分钟的英文高电压无菌， 待培養计划基溫度升到55度时，加 入已滤过的40% 红葡萄糖水 50 ml0.2% adenine(1L)Adenine    2g补充水分到1L，溶解出来后高电压无菌或0.22um 滤膜滤过除菌注 意 事 项1.感慨态受损肿瘤上皮癌内部最棒在冰面溶化。2.转换亚砷酸钠值的质粒可特定减掉既定使适用涂板的菌量。3.另外转换2-3种质粒时可新增质粒的使用量。4.Y2HGold发酵粉菌株对持续高温敏锐，最适繁殖溫度为27-30℃；低于31℃，繁殖线速度快和转换工作效应呈股价指数骤降。5.菌落变粉不会空气污染，是发酵粉受损肿瘤上皮癌内部繁殖中一位多见不良现象。当受损肿瘤上皮癌内部在小米pad电脑培養计划几巨星，小米pad电脑上的Adenine被发酵粉所耗已完成，发酵粉想着借助工作中产生路径制成Adenine以供借助，或许，有部分菌株的ADE2dna被损坏，Adenine制成路径受到限制；又犹豫其ADE4,5,6,7,8dna均普通情况，因为出现中有机物P-ribosylamino imidazole（AIR）在受损肿瘤上皮癌内部中积累更多而使菌落转换成粉橙红色。6.发酵粉在多见问题培養计划基中繁殖线速度快比YPDA培養计划基慢，培養计划基中多见问题化学物质就越，繁殖变慢，以转换涂板举例：涂YPDA小米pad电脑29℃，48h培養计划可看见的截面积怎么算1mm克隆；涂SD单缺小米pad电脑29℃，48-60h培養计划可看见的截面积怎么算1mm克隆，涂SD双缺小米pad电脑29℃，60-80h培養计划可看见的截面积怎么算1mm克隆，涂SD三缺或四缺小米pad电脑小米pad电脑29℃，80-90h培養计划可看见的截面积怎么算1mm克隆。  

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