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基 因 型Agrobacterium rhizogenes(strR )  MSU440 Ri (agropine type)简 要 说 明发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的某种革兰氏阴土壤生物碳质微海洋生物，它会感动通常数双子叶草木和部分订单叶草木及其某个裸子草木。MSU440发根农杆菌菌株有农杆碱型Ri质粒，拥有常见的宿体範圍（小麦，烟草行业，茶树，青蒿等），还拥有链霉素抗性。海洋生物开发建设的 MSU440发根农杆菌电转享受态特点用到于大质粒的转为：经pCAMBIA2301质粒 (size:11633 bp)查重转为错误率>105 cfu/μgDNA；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40 kd）查重转为错误率可以达到5×103 cfu/μg DNA。操 作 说 明1. 0.1 cm触电杯和杯盖从存储液中扔掉上下颠倒于无残留的吸附书本上五分种，待其沥干人体水分，正置五分种，使甲醇做好蒸发，待甲醇蒸发无残留即刻添加图片冰中，级配碎石冰面，电极材料杯顶离冰面0.5 cm以方面扣上杯盖，冰中静置五分种做好降低温度的。2. 取-80℃手机截图的农杆菌享受态添加图片冰中五分种，待其化掉，进入0.01-1 μg质粒DNA（比热容很小于6ul，好用化学药品盒抽提，双蒸水融掉；转为错误率较高，最次实用前好做预实践认定所加质粒的量），手去播打管底混匀，即刻添加图片冰中，用200 μl枪头将享受态-质粒混杂物更快移到触电小杯，扣上杯盖，空管抹去以备。3. 初始化电转仪，设为叁数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此叁数为Biorad 引荐，实用者也可按所要电转仪引荐的protocol操控），将触电杯从冰中扔掉，吸附纸吸掉相貌面土壤水分，更快复制到电转槽中，初始化触电，触电结束更快添加图片冰中，进入1 ml无消炎药的TY，并传递到享受态空管内，28℃自由振荡培植2~3H候。4. 6000 rpm离心力1份种收菌，留取100 μl左右时间上清轻柔吹打重悬菌块涂装于含相同消炎药的安卓平板电脑上，上下颠倒放于28℃培植箱培植72H候注 意 事 项1. 进入质粒时比热容应当多于享受态比热容的1/10；质粒不纯或产生甲醇等生物碳物的污染，转为错误率骤然变低；质粒增高多一倍，转为错误率变低一些數量级。2. 电转享受态細胞中不能不以渗入裂痕，转为高有机废气浓度的质粒可相同才能缩短终结用到涂板的菌量。3. 安卓平板电脑上阳型反应克隆密享受大时，可能有营养严重不足，阳型反应克隆生长的减缓，菌落变小，为提升大的菌落，应才能缩短质粒需水量或终结用到涂板的菌量。4. MSU440拥有链霉素抗性，不能不以用到拥有链霉素抗类型粒的转为。  

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