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基 因 型Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)简 要 说 明发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的另一种革兰氏假阳型反应土壞细菌病毒，它可妇科感染基本上都数双子叶绿植和半数订单叶绿植、少数个别裸子绿植。Ar.A4发根农杆菌菌株富含农杆碱型Ri质粒，拥有比较广泛的寄主条件（甜玉米，盐业，胡白萝卜，甘草等），一同拥有卡那霉素抗性。怪物定制开发的Ar.A4发根农杆菌电转感言态特别的不适采用大质粒的应用：经pK7WGF2质粒 (size:11876 bp)测量应用的的应用的率>105 cfu/μg DNA；经pK7WGF2-ZH质粒（size:40 kd）测量应用的的应用的率达到5×103 cfu/μg DNA。操 作 说 明1. 0.1 cm触电杯和杯盖从放置液中取出上下颠倒于洁净的储水一张纸五小時，待其沥干土壤含水量，正置五小時，使无水无水无水乙醇有力地散发，待无水无水无水乙醇散发洁净随时进到这一领域冰中，压紧冰面，电级杯顶离冰面0.5 cm以有利盖起来杯盖，冰中静置五小時有力地物理降温。2. 取-80℃保存图片的农杆菌感言态进到这一领域冰中五小時，待其融解，入驻0.01-1 μg质粒DNA（质量不太于6ul，较好用化学药品盒抽提，双蒸水融解；应用的的应用的率较高，首个次应用的前较好做预實驗敲定所加质粒的量），用力播打管底混匀，随时进到这一领域冰中，用200 μl枪头将感言态-质粒混合式物飞速移到触电杯里，盖起来杯盖，空管删去以备。3. 启用的电转仪，設置参数表值：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数表值为Biorad 建议，应用的者也可按所使用电转仪建议的protocol操作的），将触电杯从冰中取出，储水纸吸走看上去面含水量，飞速放电转槽中，启用的触电，触电完全飞速进到这一领域冰中，入驻1 ml无抗菌素的TY，并转换到感言态空管内，28℃自激振荡培養2~3小時。4. 6000 rpm离心式一小時收菌，留取100 μl之间上清悄悄地吹打重悬菌块涂装于含合理抗菌素的TYuv上，上下颠倒放于28℃培養箱培養2-3天注 意 事 项1. 入驻质粒时质量不能超出感言态质量的1/10；质粒不纯或产生无水无水无水乙醇等生物碳物弄脏，应用的的应用的率急骤增涨；质粒大多一倍，应用的的应用的率增涨有一个数目级。2. 电转感言态癌细胞中无法吸进导致气泡，应用高溶液浓度的质粒可合理变少结果是采用涂板的菌量。3. uv上阳型反应克隆密熬过来大时，基于蛋白质达不到，阳型反应克隆植物的生长超慢，菌落变小，以便领取大的菌落，应变少质粒需求量或结果是采用涂板的菌量。4.  Ar.A4拥有卡那霉素抗性，无法采用拥有卡那霉素抗特性粒的应用。

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