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基 因 型Agrobacterium rhizogenes(kanR  ) Ar A4 Ri(agropine  type)简 要 说 明发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一项革兰氏弱阳土体细菌和病毒，它还可以患上 基本数双子叶动花草和少数几个交易叶动花草包括个体裸子动花草。Ar.A4发根农杆菌菌株有效农杆碱型Ri质粒，有着非常广泛的宿主组织标准（小麦，盐业，胡小萝卜，甘草等），互相有着卡那霉素抗性。 菌物加工的Ar.A4化学上变为体验态组织经特殊化技艺自制，pK7WGF2质粒（雄伟霉素抗性）查测，变为安全使用率>104 cfu/μg DNA。 操 作 说 明1.取-80℃存储的Ar A4发根农杆菌体验态于环境温度或手掌时光待其部份溶化，所处冰水混合式方式时复制到冰中。2.每100μl体验态假如0.01-1 μg质粒DNA（变为安全使用率较高，弟一次性安全使用前比较好做预实验操作认定所加质粒的量），手摸迅速、胸骨后疼痛致电管底混匀或用枪吹吸混匀，由小到大放于冰中静置两半个每小时、液氮两半个每小时、37℃水浴两半个每小时、冰浴两半个每小时。3. 冰浴中再取出放环境温度，假如700μl 无抗菌药的TY 药液塑造教育基，于 28℃振动塑造教育 2每小时。4. 6000 rpm 抽滤一半个每小时收菌，留取 100 μl 两边上清悄悄的吹打重悬菌块涂抹于含相关抗菌药的 TY板式上，反过来放于 28℃塑造教育箱塑造教育 2-3 天注 意 事 项1. 假如质粒时质量不该达到体验态质量的1/10；质粒不纯或会存在无水乙醇等有机肥料物被污染，变为安全使用率急聚减低；质粒增高两倍，变为安全使用率减低一些使容量级。2. 混匀质粒时先手摸指迅速致电管底或用枪吹吸混匀，一定谨记使质粒迅速、不均不集中开，与体验态组织更加充分接触性。变为高氧浓度的质粒可相关避免进而代替涂板的菌量。3. 板式上弱阳克隆密熬过大时，可能蛋白质不佳，弱阳克隆生长期太慢，菌落变小，为着赢得大的菌落，应避免质粒容量或消减涂板的菌量。4. Ar.A4有着卡那霉素抗性，无可代替有着卡那霉素抗类别粒的变为。  

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