产品介绍

基 因 型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pJIC SA_Rep -tetR)简 要 说 明GV3101(pJIC SA_Rep)菌株为C58型底色，核DNA中带有需求标贴——利福平抗性DNArif，是因为因为便宜转成工作，此菌株带上一无身体轉運用途的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒带有virDNA (virDNA是T-DNA加盟值物DNA组一定要的部件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒身体的T-DNA转到用途被损坏，但不错作用转到的双元承载T-DNA工作顺利转到)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒带有需求标贴：gent，给GV3101菌株庆大霉素抗性；在GV3101菌株中转站到help质粒：pJIC SA_Rep当以GV3101(pJIC SA_Rep)菌株，可作用pgR106，pgR107，pGreen，pGs2品类质粒在农杆菌中黏贴，一同给该菌株四环素（tet）抗性，实使广泛适用拟南芥、香烟、苞米、花菜等值物的转DNA工作。海洋生物的开发的GV3101(pJIC SA_Rep)电转体会心得态十分实使广泛适用大质粒的转成：经pGs2(卡那霉素抗性)质粒检查测量转成的的错误率>106 cfu/μg。 操 作 说 明1. 0.1 cm点击杯和杯盖从处理液中不得不拿出上下颠倒于清洗的容易吸水紙上4201两分种，待其沥干含水量，正置4201两分种，使乙酸乙酯有力发挥物，待乙酸乙酯发挥物清洗当即加盟冰中，夯实冰面，金属电极杯顶离冰面0.5 cm以便宜盖起来杯盖，冰中静置4201两分种有力减温。2. 取-80℃保持的农杆菌体会心得态加盟冰中4201两分种，待其消融，加盟0.01-1 μg质粒DNA（密度计算并不太于6ul，体会心得态转成的的错误率较高，第一点次动用前最合适做预进行实验判别所加质粒的量），用力打电话管底混匀，当即加盟冰中，用200 μl枪头将体会心得态-质粒混合型喂养物迅速移到点击杯杯，盖起来杯盖，空管补齐待会儿用。3. 进行电转仪，设备产品参数值：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此产品参数值为Biorad 举荐，动用者也可按所便用电转仪举荐的protocol工作），将点击杯迅速放进去电转槽中，点击进行迅速加盟冰中，加盟700 μl无抗菌药的LB并转到到体会心得态空管上，28℃自激振荡培育教育2~3每小时。4. 6000 rpm抽滤一201两分种收菌，留取100 μl左右侧上清轻抚吹打重悬菌块涂覆于含会按照抗菌药的LB或YEB安卓手机板材上，上下颠倒放于28℃培育教育箱培育教育2-3天      （当安卓手机板材只带有50 μg/ml kan 时，28℃培育教育48 h既能；安卓手机板材中一同加盟50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃培     养60 h；如果动用的安卓手机板材带有50 μg/ml rif 则要28℃培育教育72-90 h）。注 意 事 项1. 加盟质粒时密度计算不能不低于体会心得态密度计算的1/10；质粒不纯或存有乙酸乙酯等有机化学物生态破坏，转成的的错误率骤然不升反降；质粒少好几倍，转成的的错误率不升反降有一个数级。2. 转成高氧密度的质粒可会按照少最终能够使广泛适用涂板的菌量，本平台分娩的GV3101(pJIC SA_Rep)体会心得态細胞具备有四环素抗性，但在转到梦想质粒涂板需求抗体阳型克隆时，只需加盟梦想质粒抗性的抗菌药，不放四环素。3. 安卓手机板材上抗体阳型克隆密过好大时，采取到有营养过低，抗体阳型克隆种子发芽超慢，菌落变小，是因为收获大的菌落，应少质粒容量。4. 利福平氧密度不能如果超过25 μg/ml，过高的利福平氧密度不良于农杆菌种子发芽，会削减其种子发芽的速度和转成的的错误率。5. 培育教育基中放盟利福平的最终目的是解决杂菌种子发芽、需求农杆菌；会按照所便用菌株抗性加盟链霉素或庆大霉素可解决Ti质粒找不到，但链霉素不良于农杆菌的转DNA工作，培育教育农杆菌时不采取链霉素或庆大霉素，Ti质粒找不到的概率分析过低。

此产品需要干冰运输发货，会根据路途及包装大小收取一定的干冰运费。