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基 因 型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-tetR)简 要 说 明 GV3101(pJIC SA_Rep)菌株为C58型后台，核DNA中有效选择元素——利福平抗性DNArif，要想能够有效的还原成食用，此菌株随身携带一无个人还原成技能的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒有效virDNA (virDNA是T-DNA嵌入植被DNA组必须的元器件封装，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒个人的T-DNA转出技能被影响，但要求促进转至的双元平台T-DNA顺遂转出)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒有效选择元素：gent，增添GV3101菌株庆大霉素抗性；在GV3101菌株中转地至help质粒：pJIC SA_Rep成为GV3101(pJIC SA_Rep)菌株，可促进pgR106，pgR107，pGreen，pGs2类型质粒在农杆菌中副本，而且增添该菌株四环素（tet）抗性。常中用拟南芥、香烟、苞米、西瓜等植被的转DNA食用。菌物生產的GV3101(pJIC SA_Rep)生物有效的还原成感想态组织经专项 技艺自制，pGs2(卡那霉素抗性)质粒论文检测有效的还原成高工作效应>103 cfu/μg DNA。 操 作 说 明1. 取-80℃另存的农杆菌感想态于室内温度或手掌心一刻待其局部融入，长期处在冰水混合着的情况时嵌入冰中。2. 每100 μl感想态入驻0.01-1 μg质粒DNA（有效的还原成高工作效应较高，1、次食用前做好做预实验所选择所加质粒的量），拿手打管底混匀，由小到超出冰里静置五1四钟头左右两边、液氮五1四钟头左右两边、37℃水浴五1四钟头左右两边、冰浴五1四钟头左右两边。3. 入驻700 μl无四环素的LB或YEB液塑造养成出来液，于28℃振动塑造养成出来2~3每小时。4. 6000 rpm离心力一1四钟头左右两边收菌，留取100 μl左右两边上清悄悄的吹打重悬菌块施胶于有刺激性效四环素（没含四环素抗性）的LB或YEB板材上，反过来放于28℃塑造养成出来箱塑造养成出来2-3天。（当板材只有效50 μg/ml kan 时，28℃塑造养成出来48 h既能；板材中而且入驻50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃塑造养成出来60 h；假若食用的板材有效50 μg/ml rif 则要求28℃塑造养成出来72-90 h）。注 意 事 项1. 入驻质粒时质量分数允许超出感想态质量分数的1/10；质粒不纯或普遍存在无水乙醇等有机会物严重污染，有效的还原成高工作效应骤降上升；质粒过大1倍，有效的还原成高工作效应上升其中一个总数级。2. 有效的还原成高质量有机废气含量的质粒可有效减小终究中用涂板的菌量，本装修公司生產的GV3101(pJIC SA_Rep)生物有效的还原成感想态组织有四环素抗性，但在转至任务质粒涂板选择阳型克隆时，只需入驻任务质粒抗性的四环素，不加以四环素。3. 板材上阳型克隆密解决大时，仍然蛋白质缺点，阳型克隆植物植物植物的植物生长比较慢，菌落变小，要想取得大的菌落，应减小质粒容量。4. 利福平质量有机废气含量允许超出25 μg/ml，过高的利福平质量有机废气含量影响于农杆菌植物植物植物的植物生长，会降低了其植物植物植物的植物生长速度快和有效的还原成高工作效应。5. 塑造养成出来液中入驻利福平的作用是以阻止杂菌植物植物植物的植物生长、选择农杆菌；通过所需菌株抗性入驻链霉素或庆大霉素可以阻止Ti质粒丟失，但链霉素影响于农杆菌的转DNA食用，塑造养成出来农杆菌时不遵循链霉素或庆大霉素，Ti质粒丟失的可能性较低。

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