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基 因 型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-p19-tetR)简 要 说 明p19淀粉酶因素于番茄丛矮新冠病毒，可压制宿体外商源遗传染色体遗传组的RNA沉默无言作用，不断提高异源遗传染色体遗传组转录本的平衡性，随之加速异源淀粉酶的表答，比较广泛适用性于转遗传染色体遗传组值物及烟草行业行业嫩叶，拟南芥嫩叶，番茄嫩叶或原始质体的瞬时表答系统中。GV3101菌株为C58型视频背景，核遗传染色体遗传组中带有筛分价格标签设计——利福平抗性遗传染色体遗传组rif，为着能够有利图片转换运行步骤，此菌株带上一无本身图片转换工作的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒带有vir遗传染色体遗传组 (vir遗传染色体遗传组是T-DNA放入值物遗传染色体遗传组组必要的电子器件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒本身的T-DNA移转工作被危害，但不错帮到转给的双元质粒T-DNA顺利完成移转)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒带有筛分价格标签设计：gent，彰显GV3101菌株庆大霉素抗性；在GV3101菌株中转站给help质粒：pSoup-p19其为GV3101(pSoup-p19)菌株，可帮到pGreen，62SK，pGs2等质粒在农杆菌中被拷贝，同时彰显该菌株四环素（tet）抗性。适用性于拟南芥、烟草行业行业、金盐、马玲薯等值物的转遗传染色体遗传组运行步骤。的出产的GV3101(pSoup-p19)化工图片转换感悟态组织经特种出产技术制造，pGs2(卡那霉素抗性)质粒论文检测图片转换的出产率>103 cfu/μg DNA。操 作 说 明1. 取-80℃留存的农杆菌感悟态于在常温或手脚此刻待其地方融解，发生冰水混感觉时放入冰中。2. 每100 μl感悟态参与0.01-1 μg质粒DNA（图片转换的出产率较高，第1 次应用前很好做预科学试验确保所加质粒的量），手摸咨询管底混匀，先后于冰上运动静置分之五钟、液氮分之五钟、37℃水浴分之五钟、冰浴分之五钟。3. 参与700 μl无抗菌素的LB或YEB液态物质的微生物塑造基，于28℃震荡的塑造2~3小时内。4. 6000 rpm离心法一一1分左右时间左右时间收菌，留取100 μl左右时间上清悄悄吹打重悬菌块涂布纸于含特定抗菌素的LB或YEB扁平上，上下颠倒放于28℃的塑造箱的塑造2-3天（当扁平只带有50 μg/ml kan 时，28℃的塑造48 h时需；扁平行同时参与50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需28℃的塑造60 h；如果你应用的扁平带有50 μg/ml rif 则需用28℃的塑造72-90 h）。注 意 事 项1. 参与质粒时质量不能不低于感悟态质量的1/10；质粒不纯或含有工业乙醇等设计物危害，图片转换的出产率骤降走低；质粒变大增加一倍，图片转换的出产率走低是一个使摄入量级。2. 图片转换高质量渗透压的质粒可特定减轻后面用作涂板的菌量，本工厂的出产的GV3101(pSoup-p19)化工图片转换感悟态组织含有四环素抗性，但在转给的关键质粒涂板筛分弱阳克隆时，只需参与的关键质粒抗性的抗菌素，没加四环素。3. 扁平上弱阳克隆密过好大时，犹豫膳食纤维缺点，弱阳克隆出现比较慢，菌落变小，为着能够荣获大的菌落，应减轻质粒摄入量。4. 利福平质量渗透压不能少于25 μg/ml，过高的利福平质量渗透压不便于农杆菌出现，会缩减其出现快速和图片转换的出产率。5. 的微生物塑造基中参与利福平的原则是以防杂菌出现、筛分农杆菌；不同使用菌株抗性参与链霉素或庆大霉素可以防Ti质粒损失，但链霉素不便于农杆菌的转遗传染色体遗传组运行步骤，的塑造农杆菌时不注重链霉素或庆大霉素，Ti质粒损失的成功率太低 。

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