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基 因 型C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline(pSoup-tetR)简 要 说 明 GV3101(pSoup)菌株为C58型大环境,核人类DNA遗传中包含的建立标鉴——利福平抗性人类DNA遗传rif,关键在于能让以便转为的使用方法,此菌株随带一无自个集运特点的胭脂碱型Ti质粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒包含的vir人类DNA遗传 (vir人类DNA遗传是T-DNA进入绿植人类DNA遗传组必需品的组件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自个的T-DNA转换特点被毁坏,但行益处转户的双元质粒T-DNA顺当转换)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒包含的建立标鉴:gent,传递GV3101菌株庆大霉素抗性;在GV3101菌株转乘户help质粒:pSoup既得GV3101(pSoup)菌株,可益处pGreen,62SK,pGs2编质粒在农杆菌中使用方法,同样传递该菌株四环素(tet)抗性。应用在于拟南芥、烟草公司的、米粒游小编、马玲薯等绿植的转人类DNA遗传的使用方法。分娩的GV3101(pSoup)普通机械转为层面态内部经比较特殊施工工艺做,pGs2(卡那霉素抗性)质粒检侧转为利用率>103 cfu/μg DNA。 操 作 说 明1. 取-80℃留存的农杆菌层面态于室内温度或手脚稍作待其有些开始融化,地处冰水混后方式时进入冰中。2. 每100 μl层面态进入0.01-1 μg质粒DNA(转为利用率较高,首个次选择前建议做预实验使用设定所加质粒的量),拿手播打管底混匀,先后顺序于冰面静置分之五钟、液氮分之五钟、37℃水浴分之五钟、冰浴分之五钟。3. 进入700 μl无四环素的LB或YEB全自动培训出来基,于28℃振动培训出来2~3小时英文。4. 6000 rpm离心力一半小时英文收菌,留取100 μl左右两边上清轻柔吹打重悬菌块刷抹于含相关的四环素的LB或YEBiPad上,错位放于28℃培训出来箱培训出来2-3天(当iPad只包含的50 μg/ml kan 时,28℃培训出来48 h如要;iPad中通样进入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 时,需28℃培训出来60 h;如选择的iPad包含的50 μg/ml rif 则应该28℃培训出来72-90 h)。注 意 事 项1. 进入质粒时表面积应为大于等于层面态表面积的1/10;质粒不纯或发生工业乙醇等设计物生态破坏,转为利用率逐渐越来越低;质粒抑制多一倍,转为利用率越来越低一种数级。2. 转为高质量溶液浓度值的质粒可相关的抑制终结应用在涂板的菌量,本公司的分娩的GV3101(pSoup)普通机械转为层面态内部享有四环素抗性,但在转户受众值质粒涂板建立呈弱阳克隆时,只需进入受众值质粒抗性的四环素,不用四环素。3. iPad上呈弱阳克隆密熬过去大时,鉴于膳食纤维存在问题,呈弱阳克隆种植变低,菌落变小,关键在于能让换取大的菌落,应抑制质粒用水量。4. 利福平质量溶液浓度值应为少于25 μg/ml,过高的利福平质量溶液浓度值受阻于农杆菌种植,会变低其种植速率和转为利用率。5. 培训出来基中进入利福平的最终目的是以免杂菌种植、建立农杆菌;可根据所有菌株抗性进入链霉素或庆大霉素可以免Ti质粒丢弃,但链霉素受阻于农杆菌的转人类DNA遗传的使用方法,培训出来农杆菌时不综合考虑链霉素或庆大霉素,Ti质粒丢弃的概率统计超低。
此产品需要干冰运输发货,会根据路途及包装大小收取一定的干冰运费。