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基 因 型F- ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm (DE3) pRARE2 (CamR)简 要 说 明 Rosetta 2(DE3)菌株种类于BL21，是BL21的诞生菌株，为Lon球蛋清酶酶和膜外球蛋清酶酶OMPT的疵点型菌株，这几种酶的低下行之有效必免异源球蛋清酶在消化道杆菌内的挥发。将有着氯霉素抗性的pRARE2质粒导出BL21 (DE3)上皮細胞膜核中在于Rosetta 2(DE3)，pRARE2质粒可补充营养消化道杆菌由于缺乏的7种珍贵账户密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)相对应的的tRNA，从而提高外源dna的表述方法情况。该菌株脱色体提高了λ噬菌体DE3区 (DE3区富含T7噬菌体RNA汇聚反应酶)，可互相表述方法T7 RNA汇聚反应酶和消化道杆菌RNA汇聚反应酶，能用的 于pET系统，pGEX，pMAL等质粒的球蛋清酶表述方法。Rosetta 2(DE3)感想态上皮細胞膜核由特别工艺设计制造，pUC19质粒判断变为高能力达108 cfu/μg DNA。 操 作 说 明1. Rosetta 2(DE3)感想态上皮細胞膜核从-80℃拿走，快速放进去冰中，分之五钟后待菌块溶化，引入意义质粒同用手咨询EP管底慢慢地混匀(应对用枪吸打)，冰中静置2分之五钟。2. 42℃水浴热激45秒，快速放回冰中并静置2分鐘，震动会减小变为高能力。3. 向抽滤力管上引入700 μl可含四环素类的LB无菌室的培養教育计划液，37℃，200 rpm新生儿苏醒60分鐘。4. 5000 rpm抽滤力1分鐘收菌，留取50 μl上下上清慢慢地吹打重悬菌块并刷抹到含应当四环素类的LB的培養教育计划基上。5. 将手机平板倒放放于37℃的培養教育计划箱住宿的培養教育计划。注 意 事 项1. 感想态上皮細胞膜核最容易在冰中比较慢溶化，放进去冰中8分鐘内引入关键DNA，没法在冰中加置事件偏长，长事件我们要存放在会减小变为高能力。2. 变为高氧化还原电位的质粒可应当极大减少后面应用在涂板的菌量。3. 分析时，IPTG氧化还原电位可以（0.1-10 mM均可）。4. 为才能得到必须要 量的球蛋清酶，最合适分析事件，溫度，IPTG氧化还原电位需试验者提高。5. Rosetta 2(DE3) 菌株随身携带 pRARE2质粒，除新生儿苏醒的培養教育计划基为无四环素类外，其它常用的培養教育计划基、的培養教育计划液均应富含34 µg/ml氯霉素，避免质粒丟了。

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