产品介绍

BL21 是最旱定制开发的在原核理解的菌株，BL21（DE3）、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一题材原核理解菌株均渠道于 BL21 菌株。该菌株主要是在非渗透性淀粉酶酶的理解，不添加 T7 RNA 汇聚酶，于是不在由 T7 再启动子驱使的淀粉酶酶理解(如：pET 题材)；但包含的肠子杆菌 RNA 汇聚酶，都可以在 tac 或 trc 等采用肠子杆菌 RNA 汇聚酶的原核机系统的理解（如：pGEX，pMAL 质粒）。AngYuBio High5 TM 题材 BL21 高压电击感语态受损细胞由特出施工工艺自制，经 pUC19 质粒检侧变为能力达 10 9 cfu/μg。 操作的原因分析 1. 0.1cm 雷击杯和杯盖从处理液中丢掉颠倒于整洁的的吸潮白纸 5 小时的英文，待其沥干补充，正置 5 小时的英文，待乙酸乙酯析出整洁的再次插进冰中，回填土冰面，参比电极杯顶离冰面 0.5 cm 以便宜盖起来杯盖，冰中静置 5 小时的英文加以降低温度的。 2. 取-80℃保留的 BL21 点击体验态肿瘤细胞进到这一领域冰中 5 分种，待其冰化，申请加入的目的 DNA (质粒或对接生成物)使用手拨号 EP 管底缓缓的混匀，避开引起汽泡，实时进到这一领域冰中。 A. 校正转化成有效率选用 1 μl 10 pg/μl 的对应质粒 pUC19； B. 对盐密度较高的 DNA 悬浊液或响应采集体系试着无水乙醇沉淀自己 DNA 后入驻适量的 TE 储存液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬，而后与雷点击体验态混和来雷点击转成。 3. 用 200 μl 枪头(用刀割掉 0.5cm 枪尖)将感慨态-DNA 混合式物如何快速移到雷电击杯里，减少制造裂痕，盖住杯盖。 4. 加载电转仪，布置运作指标：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此为 BioRad 电转仪强烈推介运作指标，也可按适用电转仪强烈推介的运作指标实际操作），将雷击杯很快放到电转槽中，雷击做好很快嵌入冰中。 5. 2 分鐘后从冰中拿出来雷雷电击杯，放高温，假如 700 μl 不含有消炎药的没有细菌 S.O.C. 锻炼基（高温），用 1ml 枪吹吸雷雷电击杯低部无数次混匀后，转让到 50 ml 离心分离法法管（BD Falcon 50 ml 椎型离心分离法法管等），向离心分离法法管内补加 S.O.C. 锻炼基至 10 ml。37℃，225 rpm 溶栓 60 分鐘。 6. 5000 rpm 离心法很多钟收菌，重悬后取 100-200 μl 刷抹到含相同抗菌素的 S.O.C 华为平板等电脑上（因菌量较高，若大部分涂板请选择直徑 15cm 训练计划皿 2-5 个）。将华为平板等电脑上下颠倒放于 37℃训练计划箱過夜训练计划 13-17 小的时候。 注意事情事情 1. 加如 DNA 时质量计算不得以上感想怎么写态质量计算的 1/10。 2. 点击感悟态血细胞入驻点击杯应防范呈现导致裂痕，导致裂痕会多弧光发出电安全风险。 3. 当 DNA 不纯或有着盐，酒精，淀粉酶及降低液等被污染的时，转换成吸收率陡然骤降。 4. 雷击杯里的铝离子可提升液体的电导，扩大在具有受损细胞和 DNA 的液体中所产生电流值和弧光充放的风险隐患。 5. 若有效的变为大质粒或想赢得较高有效的变为学习速率，高性价比用到高纯质粒导入制剂盒导入质粒。质粒增多两倍，有效的变为学习速率下滑一些人数级。 6. 参与 DNA 氧化还原电位不可过高，最容易不已经超过 100 ng/μl。过高氧化还原电位质粒会降底转为成功率，新增弧光电池充电的的风险。 7. 掺进质粒的时候轻缓进行，吸收极其态内部时预防使劲儿过猛，切勿切面力过大挫裂伤内部膜，有效降低转变成错误率。转变成高盐浓度的质粒或接触副产物可根据抑制不可能中用涂板的菌量。 8. 触电感言态内部合适保存文档在-80℃下，远超-80℃超期儲存会出现转变生产率会降低。

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